ELISA试剂盒的实验概念原理操作步骤

ELISA试剂盒的实验概念、原理、操作步骤

ELISA试剂盒是酶联接免疫吸附剂测定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技能以后开展起来的一种免疫酶技能。此项技能自70年代初面世以来，开展十分迅速，现在已被广泛用于生物学和医学科学的很多范畴。（一） 原理ELISA是以免疫学反响为根底，将抗原、牽9体的特异性反响与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技能。因为抗原、抗体的反响在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每参加一种试剂孵育后，可通过洗刷除掉剩余的游离反响物，然后保证实验成果的特异性与稳定性。在实践使用中，通过不一样的规划，详细的办法过程可有多种。即:用于检查抗体的间接法、用于检查抗原的双抗体夹心法以及用于检查小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是国产ELISA试剂盒双抗体夹心法及ELISA间接法。（二） 操作过程办法一 用于检查不知道抗原的双抗体夹心法:1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反响孔中加0.1ml，4℃**。次日，弃去孔内溶液，用洗刷缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗刷，下同）。2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反响孔中，置37℃孵育1小时。然后洗刷。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。3. 加酶标抗体：于各反响孔中，参加新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗刷。4. 加底物液显色：于各反响孔中参加暂时制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。5. 停止反响：于各反响孔中参加2M0.05ml。6. 成果判定：可于白色布景上，直接用肉眼观察成果：反响孔内色彩越深，阳性程度越强，阴性反响为无色或极浅，根据所呈色彩的深浅，以“+”、“-”号表明。也可测O·D值：在ELISA检查仪上，ELISA试剂盒于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规则的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。