关于HE染色法的具体操作步骤你都知道哪些

关于HE染色法的具体操作步骤，你都知道哪些？

关于HE染色法的具体操作步骤，你都知道哪些？

HE染色原理HE 染色法为苏木精-伊红染色法，是石蜡切片技术里常用的染色法之一，也是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中基础、广泛的技术方法。属性为碱性的苏木素染色液可以使细胞着蓝色，为酸性的伊红使细胞着红色，其结果胞核呈蓝色，胞浆呈红色。两种不同的染色液使细胞通过颜色来改变折光率，在光镜下呈现出细胞图像。HE染色法之所以成为细胞染色常用的方法是因为HE染色法过程中除化学反应外，还有物理作用中吸附、吸收效果，使HE染色提供良好的核浆对比染色效果。HE染色实验步骤1、样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1×105/ml，滴加于盖玻片上（置于6孔板中），培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS洗涤3次。2、样品固定：95％乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1min。3、染核：苏木素染液染色2－3min，自来水洗涤。4、分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1％盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。5、染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。6、吹干或自然晾干细胞爬片后，中性树胶封片。若细胞用4％多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5min即可。HE染色实验结果细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。着情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。实验相关用品1、固定液：常用95％乙醇和冰2、苏木精染液：称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用。3、伊红染液：称取0.5溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中。4、稀盐酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1％盐酸。5、系列浓度的乙醇、二、中性树胶。6、培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。