亮发光杆菌的分离培养

亮发光杆菌的分离、培养

亮发光杆菌实验方法 1、铜柱系统除氧2、预还原培养基及稀释液的制备 制作预还原培养基及稀释液时，先将配置好的培养基和稀释液煮沸驱氧，而后用半定量加样器趁热分装到螺口厌氧试管中，一般琼脂培养基装4.5～5.0mL，稀释液装9mL，并插入通N2气的长针头以排除O2。此时可以清楚的看到培养基内加入的氧化还原指示剂—刃天青由蓝到红最后变成无色，说明试管内已成为无氧状态，然后盖上螺口的丁烯胶塞及螺盖，灭菌备用。3、分离（1）编号 取五支无菌水试管，分别用记号笔标明10-1、10-2……10-5。（2）稀释 在无菌条件下，用无菌注射器吸取1mL混合均匀的液体样品，加入装有预还原生理盐水的厌氧试管中，用震荡器将其混合均匀，制成10-1稀释液。用无菌注射器吸取1mL10-1稀释液至另一装有9mL生理盐水的厌氧试管中，制成10-2稀释液。依此进行10倍系列稀释，至10-7，制成不同样品稀释液。通常选10-5、10-6、10-7三个稀释度进行滚管计数。（3）滚管分离1）滚管 将无氧无菌的琼脂培养基在沸水浴中溶化，置46-50℃恒温的水浴中，待用，用无菌注射器吸取10-4、10-5、10-6三个稀释度各0 .1mL，分别注入待用的试管中，然后将其平放于盛有冰水的瓷盘中迅速滚动，带菌的溶化琼脂在试管内壁会即刻形成凝固层。2）分离 生成的亮发光杆菌落需挑取出来，镜检其形态及。如尚未获得纯培养物，需再次稀释滚管，并再次挑取菌落，直至获得纯培养物为止。待挑取的单菌落预先在放大镜下观察确定，做好标记。然后将培养基试管固定于适当的支架上，打开试管胶塞，同时迅速将气流适当、火焰灭过菌的氮气长针头插入管内。同时，另一液体厌氧管去掉胶塞插入另一灭过菌的通气针头。将准备好的弯头毛细管小心插入固体培养基内，找准待挑菌落，轻轻吸取，转移至液体试管内，加塞。37℃培养。培养24h或待培养液混浊后检查已分离培养物的。邻苯二甲suan丁苄酯-D4 标准品 纯品型，有证书，10mg CDEO-NF014-25mg 呋喃唑酮代谢物的衍生物2-NP-... 25mg CDCT-C16168010连三/1,2,3-三甲基苯 1000mg/L;1ml CDGG-021128-02 1,2-二溴四氟乙烷(Hlon ... 2000mg/L;1ml CDGG-020869-05喹氧灵 1000mg/L;1ml CDGG-031657-02 戊菌唑 1000mg/L;1ml CDGG-031836-03奎宁 标准品 纯品型，有证书，0.1g CDDM-M884100-25mg 杨梅素 25mg CDCT-C16706900可溶性淀粉 5g CDGG-010408-08 蔗糖 标准品 25ml CDCP-CARB-37-5g糠醛 2000mg/L;2x0.6ml CDGG-031049-01 呋喃 1000mg/L;1ml CDGG-031264-02亮发光杆菌