智能快速液相制备色谱系统SepaBeanTM machine再添新功能

智能快速液相制备色谱系统SepaBeanTM machine再添新功能

周青，钱美圆，仇文军，徐波

应用技术研究中心

准备好样品，设定好分离方法，选好色谱柱，确认检测波长，OK！开始制备纯化吧~实验员小周熟练地开始了一个新样品的制备纯化工作，一切看起来按部就班，尽在掌握。等等，这个峰信号似乎有点偏弱啊？怎么回事？蛋白质的最大吸收波长不都是在280nm么？

小周满脸疑惑地跑去请教实验室大咖老徐。老徐看了看小周的分离方法，又问了一些关于蛋白样品的信息，慢悠悠地说：“蛋白质的检测波长一般是280nm没错，但前提是蛋白质系列中有较多带有芳香环类的氨基酸残基，你这个蛋白样品系列未知，最大吸收波长就不一定是280nm，你扫过紫外光谱没有？”小周摇摇头，表示实验室的紫外分光光度计坏了，暂时用不了。“这样啊，别着急，传授你一个新招儿，看好了，”老徐麻利地在iPad上点了几下，让小周再进一针样品，小周不明觉厉地照做了，“好了，样品的最大吸收波长找到了，是210nm左右，你下次就以210nm作为检测波长再尝试制备吧，”老徐留下几句话就飘走了。接下来，小周的实验就顺利多了，他很快就拿到了目标产物，又开始了后续的实验。

虽然只是实验室的一个小插曲，但这个故事告诉我们：三泰科技又憋出新招了——全波段扫描功能。这个功能非常实用，一个常见的应用场景就是未知吸收波长的化合物的制备纯化，有了全波段扫描功能的助力，我们就无需事先利用分光光度计对样品进行扫描，直接在SepaBeanTMmachine系统里进行上样纯化，在分离过程中通过实时监控洗脱峰的全波段扫描图谱，及时修正仪器的检测波长，从而高效地完成分离纯化任务。

上述蛋白纯化案例的具体实验参数如表1所示：

表1.蛋白样品的分离纯化实验参数设置

修正检测波长前及修正后的蛋白样品分离图谱如图1和图2所示：

图1.检测波长280nm下的蛋白样品分离图谱。

图2.检测波长215nm下的蛋白样品分离图谱。

全波段扫描功能的应用范围远远不止于上述情形，例如，在分离纯化这样的一组混合物样品时，混合物里每个组分的最大吸收波长都不相同，对于事先确定的检测波长来说就显得不太适用，此时我们就可以通过实时监控洗脱峰的全波段扫描图谱并及时修正检测波长，实现精确的目标峰收集。后续我们实验室会推出更多此类案例的应用文章，敬请期待和保持关注！

文中所用蛋白纯化柱订购信息如下表所示：

表2. SepaFlash®HP Bio C18系列反相柱参数

（填料:High efficiency spherical C18, 20-45μm, 300Å）