试剂盒实验的正确加样方法

试剂盒实验的正确加样方法

ELISA试剂盒应用定性夹心免疫检测技术，用合成的HEV抗原包被微孔板板条，这些是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗体，这些抗体就会与HEV 的抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。

ELISA试剂盒实验的正确加样方法：1、仔细阅读运用说明书。2、仔细校正温度到37℃，水浴箱为佳； 3、在运用进程校正加样器；10ul以下加样器选用进口产品（芬兰、法国等）；4、运用去离子水或蒸馏水，不得用自来水、矿泉水等。5、加样时一定要仔细，加样后，再检查，以防漏加、错加。6、加样后，重复抽吸3次混匀，防止血清调集孔底，致使非特异性吸附。ELISA试剂盒然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液。在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体Elisa试剂盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。