液相色谱柱填装过程中需要注意的问题

液相色谱柱填装过程中需要注意的问题

液相色谱柱、特别是高效液相色谱柱的填装，需要有较高的技巧和熟练的技能。因此，有人甚至将“装柱”看作是“艺术加技术”。但是，只要掌握了一些基本的规律和方法，任何实验室都可以填装出具有较高柱性能的色谱柱。当然，目前大多数实验室多是购买商品预填装柱来满足分离、分析之需。但是在一些有特殊需要的情况下，或为节省经费，在实验室中自行填装高效液相色谱柱还是可取的。液相色谱柱填装程序中应该注意的问题：①高压操作的安全问题。常发生的问题是柱子与匀浆罐连接不牢，造成加压时柱头被高压冲下或柱子从匀浆罐上滑脱。此时，轻则填装失败，材料损失，重则造身伤害事故，一定要加以防范。除每次填装前均须仔细确认是否连接正确且牢靠外，最好还可加上由法兰盘和长螺杆组成的预防脱落装置，以防万一。②通常，先填装的柱床较后填装的柱床紧密。因此，当使用时宜以相反的方向为宜，即让近匀浆罐一端作为使用时流动相的出口，而填装时的出口端则作为流动相的入口。③新柱子使用前应以甲醇冲洗20-30min, 后，再改用流动相平衡。④新柱子宜选适宜的标准样品进行评价并记录，以备存查和比较。